اسیدهای آمینه پلاسما معمولاً توسط کروماتوگرافی تبادل یونی (IEC) تجزیه و تحلیل می‌شوند که روشی تکرارپذیر اما زمان‌بر است. در اینجا، ما آزمایش می کنیم که آیا اسیدهای آمینه پلاسما را می توان با استفاده از کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا فاز معکوس (HPLC) تجزیه و تحلیل کرد.
روش اندازه گیری اسیدهای آمینه
محققان روشی قوی با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا-طیف‌سنجی جرمی پشت سر هم (HPLC-MS/MS) برای تعیین کمیت اسیدهای آمینه در پلاسما ایجاد کرده‌اند که آن را به ابزاری ارزشمند برای تشخیص بالینی و تحقیقات در متابولیسم اسیدهای آمینه تبدیل می‌کند. کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) یک تکنیک جداسازی است که می تواند برای تجزیه و تحلیل ترکیبات نمونه های مختلف استفاده شود. بسته به ماهیت، ساختار شیمیایی و وزن مولکولی آنالیت ها، می توان نوع HPLC را انتخاب کرد.
مواد و روش های تجزیه و تحلیل اسیدهای آمینه پلاسما توسط HPLC
پلاسمای فیلتر شده، با S-کربوکسی متیل-l-سیستئین به عنوان استاندارد داخلی، مشتق شده و توسط یک سیستم HPLC Agilent 1100 تجزیه و تحلیل شد. اسیدهای آمینه اولیه با اسید o-phthalaldehyde 3-mercaptopropionic (OPA) مشتق شدند و توسط یک آشکارساز آرایه دیود شناسایی شدند. اسیدهای آمینه ثانویه با ۹-fluorenylmethyl chloroformate (FMOC) مشتق شدند و به روش فلورومتری شناسایی شدند. جداسازی کروماتوگرافی با دو شستشوی گرادیان (دو تزریق در هر نمونه)، با شروع با pH های مختلف، در فاز معکوس Agilent Zorbax Eclipse C18 ستون AAA (4.6×۱۵۰ میلی متر) به دست می آید.
تجزیه و تحلیل اسیدهای آمینه در مایعات فیزیولوژیکی به طور گسترده برای تشخیص و نظارت بر اختلالات متابولیسم ارثی استفاده می شود. روش مرجع برای آنالیز اسید آمینه کروماتوگرافی تبادل یونی (IEC) با تشخیص نین هیدرین به دلیل توانایی آن در تجزیه و تحلیل تمام اسیدهای آمینه مهم بالینی، دقت و حداقل آماده سازی نمونه در یک آنالیز است [۱]، [۲]. چندین روش برای آنالیز اسید آمینه با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) توسعه یافته است [۳]، [۴]، [۵]، [۶]، [۷]، [۸، [۹]، [۱۰]، ۱۱]، [۱۲]، [۱۳]، [۱۴]. آنها مزیت زمان تجزیه و تحلیل کوتاهتر را ارائه می دهند، اما تمام آمینو اسیدهای قابل تشخیص توسط IEC را از هم جدا نمی کنند. این امر به ویژه هنگام غربالگری اختلالات متابولیک مهم است.
به عنوان مثال، تشخیص و نظارت بر درمان خطاهای ذاتی متابولیسم هموسیستئین با استفاده از کمیت متیونین پلاسما، هموسیستین آزاد و هموسیستئین کل. در حالی که هموسیستئین کل پلاسما به روش جداگانه ای برای کمی سازی نیاز دارد، متیونین و هموسیستین آزاد را می توان با استفاده از IEC شناسایی و اندازه گیری کرد [۱۵، [۱۶]، [۱۷]، [۱۸]. با این وجود، روش های HPLC موجود فقط می توانند متیونین را کمی کنند [۳]، [۴]، [۵]، [۶]. آلو ایزولوسین، ایزومر لوسین و ایزولوسین، که در بیماران مبتلا به بیماری ادرار شربت افرا (MSUD) شناسایی شده و برای این بیماری پاتوگنومونیک است، با روش‌های HPLC معمولی نمی‌توان آن را از ایزولوسین جدا کرد، اما آلو ایزولوسین را می‌توان جدا کرد و به‌طور دقیق توسط IEC اندازه‌گیری کرد. [۱۹]، [۲۰]، [۲۱]. هدف از این مطالعه توسعه یک روش HPLC بود که با کروماتوگرافی تبادل یونی قابل مقایسه و برای کاربردهای بالینی مفید باشد. ترکیبی از دو جداسازی کروماتوگرافی، که از دو pH مختلف شروع می‌شوند، که در این مقاله توضیح داده شده است، امکان جداسازی اسیدهای آمینه فیزیولوژیکی در پلاسما از جمله هموسیستین آزاد، آلو ایزولوسین و اسید آرژینینوسوکسینیک را در زمانی که در غلظت‌های بالا وجود دارند، می‌دهد.
روش اندازه گیری اسیدهای آمینه
محققان روشی قوی با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا-طیف‌سنجی جرمی پشت سر هم (HPLC-MS/MS) برای تعیین کمیت اسیدهای آمینه در پلاسما ایجاد کرده‌اند که آن را به ابزاری ارزشمند برای تشخیص بالینی و تحقیقات در متابولیسم اسیدهای آمینه تبدیل می‌کند. کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) یک تکنیک جداسازی است که می تواند برای تجزیه و تحلیل ترکیبات نمونه های مختلف استفاده شود. بسته به ماهیت، ساختار شیمیایی و وزن مولکولی آنالیت ها، می توان نوع HPLC را انتخاب کرد.
آزمایش کروماتوگرافی اسیدهای آمینه
روش‌های آنالیز اسید آمینه موجود شامل کروماتوگرافی لایه نازک، کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا، کروماتوگرافی مایع-طیف‌سنج جرمی، کروماتوگرافی گازی-طیف‌سنجی جرمی، کپیلاری الکتروفورز و …می باشد. کروماتوگرافی تبادل یونی به ویژه برای جداسازی اسیدهای آمینه، پپتیدها یا پروتئین ها مناسب است.
آزمایش آمینو اسید چیست
این آزمایش برای اندازه گیری سطح اسیدهای آمینه در خون انجام می شود.افزایش سطح یک اسید آمینه خاص نشان می دهد که مشکلی در توانایی بدن برای تجزیه (متابولیسم) آن اسید آمینه وجود دارد.این آزمایش همچنین ممکن است برای بررسی سطوح کاهش یافته اسیدهای آمینه در خون استفاده شود.افزایش یا کاهش سطح اسیدهای آمینه در خون ممکن است با تب، تغذیه ناکافی و برخی شرایط پزشکی رخ دهد.
تفسیر آزمایش پلاسما آمینو اسید
افزایش سطح یک اسید آمینه خاص نشان می دهد که مشکلی در توانایی بدن برای تجزیه (متابولیسم) آن اسید آمینه وجود دارد.این آزمایش همچنین ممکن است برای بررسی سطوح کاهش یافته اسیدهای آمینه در خون استفاده شود.افزایش یا کاهش سطح اسیدهای آمینه در خون ممکن است با تب، تغذیه ناکافی و برخی شرایط پزشکی رخ دهد. همه اندازه‌گیری‌ها بر حسب میکرومول در لیتر (µmol/L) است. مقادیر نرمال ممکن است بین آزمایشگاه های مختلف متفاوت باشد. با کارشناس مراقبت های بهداشتی خود در مورد نتایج آزمایش خاص خود صحبت کنید.
عوارض کم یا زیاد بودن اسید آمینه در کودکان و بزرگسالان
آمینو اسیدها ماهیچه ها را می سازند، واکنش های شیمیایی در بدن ایجاد می کنند، مواد مغذی را انتقال می دهند، از بیماری جلوگیری می کنند و سایر عملکردها را انجام می دهند.کمبود آمینو اسید می تواند منجر به کاهش ایمنی، مشکلات گوارشی، افسردگی، مشکلات باروری، کاهش هوشیاری ذهنی، کند شدن رشد در کودکان و بسیاری از مشکلات سلامتی دیگر شود. هر یک از اسیدهای آمینه ضروری نقش متفاوتی در بدن ایفا می کند و علائم کمبود بر این اساس متفاوت است.
بالا بودن اسید آمینه در نوزادان
سطوح بالای لوسین و ایزولوسین می تواند نشان دهنده این باشد که کودک شما بیماری به نام بیماری ادرار شربت افرا دارد(MSUD). نتیجه مثبت به این معنی نیست که حتماکودک شما MSUD دارد، اما برای اطمینان بیشتر به آزمایشات بیشتری نیاز است.
کمبود اسید آمینه در کودکان
پروتئین، اسیدهای آمینه ضروری مهمی را فراهم می کند که به سلامت روحی و جسمی کودک شما کمک می کند. بدون پروتئین کافی در رژیم غذایی، کودک شما ممکن است علائمی را تجربه کند: خستگی، عدم تمرکز، کند شدن رشد، کاهش ایمنی و موارد دیگر. کودکان مبتلا به PKU نمی توانند اسید آمینه ای به نام فنیل آلانین را پردازش کنند. فنیل آلانین در بسیاری از غذاهای رایج وجود دارد. اما می تواند در جریان خون کودکان مبتلا به PKU ایجاد شود. این می تواند باعث مشکلات رشد، خلق و خو، رفتار و تفکر و همچنین مشکلات دیگری از خفیف تا شدید شود. الگوی غذایی پروتئین بی کیفیت با کوتاه قدی مرتبط است. کودکانی که رشد کوتاهی دارند نسبت به کودکانی که رشد کوتاهی ندارند، به طور قابل توجهی اسیدهای آمینه ضروری در گردش خون کمتری دارند. دریافت ناکافی اسیدهای آمینه ضروری در رژیم غذایی می تواند بر رشد تأثیر منفی بگذارد، زیرا اسیدهای آمینه برای سنتز پروتئین ها مورد نیاز هستند
بدون دیدگاه